Vineri AFM – Ce te face sa stranuti?

Héctor aici, expertul tau AFM de la Nanosurf, solicitand oamenilor sa impartaseasca experimentele lor de vineri dupa-amiaza. Astazi va ofer cateva sfaturi si trucuri despre cum sa obtineti imagini ale polenului folosind AFM. Saptamana trecuta am fost la “Le Forum des microscopies a sonde locale in Lyon”, si pe langa prezentarea studiilor nanomecanice pe salata (vezi postarea fridayAFM aici), am acceptat o solicitare de la Veronique Lachaize si Arthur Gaveau (de la A5 Science), sa examinez un „esantion special” pe o lama de sticla (in aer si in lichid, si cu orice sonda doresc, dar si cu o sonda moale de la Vmicro).

De obicei, recomand sa cunoasteti cat mai multe despre esantionul vostru inainte de a-l pune sub AFM si sa folositi AFM doar pentru a obtine date cantitative sau pentru a va extinde cunostintele putin mai mult… dar trebuie sa recunosc ca un „esantion special” este o perspectiva foarte atragatoare. Asa ca mi-am incalcat propriile reguli, l-am pus sub AFM si am facut tot ce am putut: l-am inspectat cu mai multe sonde diferite, cu moduri de imagistica diferite si cu viteze diferite, pana cand am fost convins ca ceea ce vedeam era real si nu un artefact de imagistica.

Deci… ce este? Cum arata? Ce este nu stiam inca, cum arata… aceasta este imaginea pe care am obtinut-o:

Poate daca maresc un pic este mai clar ce este cu adevarat esantionul special.

Polen. Esantionul „special” era polen atasat pe o lama de sticla folosind banda dublu-adeziva. Acum, de la ce planta anume provine, nu este clar, deoarece acesta „a fost colectat lasand lama de sticla pe fereastra laboratorului si capturand polenul adus de vant”. Care a fost trucul pentru a-l studia? Trei trucuri principale: primul, am folosit o amplitudine mare de excitatie in WaveMode pentru a ma asigura ca sonda se detaseaza complet de suprafata; al doilea, am ajustat WaveMode pentru a „atinge” cu o forta maxima de aproximativ 10 nN, fiind astfel destul de delicat; si ultimul truc, am analizat zone unde boabele erau strans impachetate impreuna, astfel incat boabele sa nu se balanseze lateral pentru ca boabele vecine le tin pe loc.

Nota: In WaveMode este posibil sa analizezi suprafata benzii adezive, deoarece aria de contact a sondei este mica si nu patrunde prea mult in banda, dar, in general, cel mai bine este sa eviti sa analizezi suprafata benzii. Apoi a venit solicitarea de a imagina in lichid. Da, acele lucruri mari in vizualizarea optica sunt bule pe suprafata (si aceea de la stanga este sonda Vmicro).

Observati ca, desi exista mai multe moduri de a constrange lichidul pentru a mentine esantionul scufundat in timp ce faceti imagistica AFM, in acest caz, am folosit doar o picatura pe care am pus-o deasupra lamelei de sticla. Prea mica si nu va fi suficient pentru a uda sonda si suportul sondei, prea mare si va stropi si va acoperi intreaga lama de sticla devenind un strat subtire.

Doamne, poate fi mai dificil? Da.
In acest caz, imagistica a avut o dificultate suplimentara, deoarece lipiciul care tinea polenul in loc sa se dizole, elibera polenul. Dar am reusit sa fac una sau doua imagini si rezultatul este destul de frumos pentru ca puteti vedea buzunare de aer capturate pe suprafata polenului.

Este acest lucru intentionat pentru a preveni ca boabele sa se inmoaie in apa? Ajuta la plutire?

Putem folosi acest lucru pentru a studia interfata apa-aer? (un vechi proiect de-al meu daca va amintiti fridayAFM despre petalele de trandafir).

Sa recapitulam. Polenul este peste tot in aceste zile, si in AFM-ul vostru? Cel putin in al meu. Desi polenul este interesant de studiat, forma sa poate fi destul de heterogena si majoritatea boabelor de polen au spini mari. In acest caz nu avea spini, dar avea buzunare adanci, care pot duce usor la artefacte de varf daca nu se folosesc sonde cu raport de aspect inalt (cum sunt cele de la Vmicro). Analiza pe o banda dublu-adeziva este dificila, dar posibila, totusi, este bine sa cautati boabe care sunt limitate de alte boabe si sa evitati atingerea benzii cu sonda. Adaugarea de lichid este interesanta si poate duce la situatii precum buzunarele de aer capturate, totusi, poate duce si la dizolvarea lipiciului, ceea ce poate limita timpul disponibil pentru imagistica sau la contaminare din reziduul de lipici.
Sper ca gasiti acest lucru util, distractiv si sa incercati si voi. Va rog sa ma anuntati daca folositi ceva din acestea, si ca de obicei, daca aveti sugestii sau solicitari, nu ezitati sa ma contactati.

Daca doriti sa aflati mai multe despre mecanica celulara, nu uitati sa consultati noua noastra nota de aplicatie despre cum sa faceti experimente nanomecanice complexe folosind caracteristica noastra Spectroscopy Plus pentru DriveAFM: Interogarea mecanicii celulare cu Spectroscopy Plus